三、固相高效色谱合成条件

Agilent5HC-C18（2）（4.6×250妹妹，液相研5μm）色谱柱，色谱时测进样量20μL，法同流速1.0mL/min，定糕点中的钻柱温35℃，种削以甲醇作为行动相A，减剂以0.02moI/L乙酸铵溶液为行动相B，固相高效梯度洗脱，液相研洗脱条件见表1。色谱时测运用二极管阵列检测器，法同光谱规模190～700nm；光谱步进值为2.0nm，定糕点中的钻光谱搜整方式。种削以保存光阴及光谱图定性，减剂在230nm以及625nm波长下妨碍检测，固相高效峰面积外标法定量。

二、服从与品评辩说

一、色谱条件的优化

本试验比力乙腈-0.02mol/L乙酸铵以及甲醇-0.02mol/L乙酸铵按表1梯度妨碍洗脱时，发现新红与苯甲酸，靛蓝与脱氢乙酸分说度达不到1.5的要求，原因可能有多少点：首先，乙腈洗脱能耐比甲醇强，在UV波长较短的色谱合成上具备较高锐敏度，且色谱级的乙腈是罗致能耐比力小的有机溶剂，故乙腈过强的洗脱能耐以及乙腈特有的性子都市组成出峰光阴靠前的目的物以及杂质峰概况相邻的峰分不开；其次，苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、纳他霉素极性相较胭脂红、日落黄、迷惑红极性偏强，接管乙腈蹊径式梯度洗脱，出峰速率快，无奈操作基质基线干扰；再者，糕点中的基质大少数为有机盐、卵白质、糖类等，乙腈洗脱不能实用防止这些基质对于目的物的干扰，试验中也经由调解梯度洗脱的比例，但黑白论若何调解依然无奈将13种目的物残缺分说，可是接管甲醇洗脱可能实用防止乙腈存在的这些下场，服从见图1。本次试验还抉择了甲醇一0.02mol/L乙酸铵与甲醇-0.02mol/L磷酸二氢铵溶液妨碍梯度洗脱，13种食物削减剂均为极性物资，与水均能互溶，接管0.02mol/L磷酸二氢铵对于防腐剂的分说不影响，可是这个水系的行动相对于色谱分说影响较大，大部份色谱均不能实用洗脱，服从见图2，综合思考，本试验最终抉择甲醇一0.02mol/L乙酸铵按表1挨次妨碍分说。

二、样品前处置优化

（1）卵白积淀剂的抉择

家养分解色素与防腐剂、甜味剂的前处置措施差距，参考相关文献，本次试验针对于糕点中的基质，抉择水系卵白积淀剂，即106g/L亚铁氰化钾以及219g/L乙酸锌溶液妨碍处置，这两种水系卵白积淀剂均为中性盐，中性盐对于卵白质的消融度有清晰影响，亚铁氰化钾以及乙酸锌积淀卵白质是一种盐析反映，由于卵白质是一种胶体，乙酸锌与亚铁氰化钾反映天生的氰亚铁酸锌积淀可能挟走或者吸附干扰物资，且这两种中性盐除了卵白能耐强，同时高浓度的盐离子水化能耐很强，可能将卵白质份子的水化层抢夺，鉴于种种卵白质份子颗粒巨细差距，故盐析所需的盐浓度也差距，本次试验经由一再测试，最终接管106g/L亚铁氰化钾溶液以及219g/L乙酸锌处置样品中卵白质下场最佳。

（2）固相萃取柱的抉择

本次试验经由样品加标接管妨碍审核，分说称取阴性样品6份，每一份2.59，各详尽退出尺度混合蕴藏液1.0mL，其余称取破碎捣毁平均的糕点样品2.5g置50mL离心管中，加25mL水，各加5mL106g/L亚铁氰化钾溶液以及5mL219g/L乙酸锌溶液，涡旋10min后，加水定容至50mL，经10000r/min冷冻离心10min后掏出，量取上清液5mL过QasisWAX固相萃取小柱（预先经3mL甲醇以及3mL水活化），弃去流出液，挨次用6mL2％甲酸以及6mL纯化水洗涤，再用5％氨化甲醇洗脱并群集于15mL离心管中，在40℃水浴中氮吹至近干后掏出部署室温，用5mL水复溶残渣，过0.45μmGHP微孔滤膜后，待测。

服从见表2，从服从可能看出，WatersOasisWAX固相萃取小柱接管率最高，对于本次试验的13种食物削减剂富集比力好，WatersOasisHLB固相萃取小柱以及WatersOasisMCX固相萃取小柱接管率次之，原因可能是，WatersOasisWAX固相萃取小柱特色为混合型弱阴离子交流反相吸附剂，具备弱阴离子交流以及非极性疏水双重熏染的混合吸附剂，对于强酸性化合物具备高的抉择性以及锐敏度，含弱碱性的胺基功能基团，适用于从碱性或者中性物资中分说纯化酸性物资，可用于强酸性化合物的处置，本次试验的13种削减剂均为水溶性化合物，接管WAX妨碍富集，2％甲酸洗涤可能将样品中离子形态的杂质洗涤去除了，再用5％氨化甲醇将富集在固相萃取小柱份子形态的削减剂妨碍离子化洗脱下来；WatersOasisHLB内的吸附剂是经由一个“特殊的极性捉拿基团”来削减对于极性物资的保存提供很好的水浸润性，用于酸性，中性以及碱性化合物的通用型吸附剂，这种性子用于合成家养分解色素极好的，可是这个小柱对于防腐剂中的纳他霉素以及富马酸二甲酯的保存富集下场较差，原因可能是HLB内填料是亲脂性化合物，而纳他霉素以及富马酸-ep酯是亲水性的，WatersOasisMCX固相萃取小柱是混合型阳离子交流反相吸附剂，对于碱性化合物具备高的抉择性以及锐敏度，MCX小柱对于部份色素以及防腐剂的富集下场也比力差，不能同时对于13种成份妨碍合成，故本次试验抉择WatersOasisWAX固相萃取小柱妨碍。

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